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尿素的测定方法
浏览次数:2004    日期:2017/6/26 14:01:38

  尿素的测定方法可分为两大类:


 一类直接法,尿素直接和某试剂作用,测定其产物,最常见的为二乙酰一肟法;


 另一类是尿素酶法,用尿素酶将尿素变成氨,然后用不同的方法测定氨。 

 

 1) 尿素酶法(直接法):尿素酶法利用尿素酶催化尿素水解生成铵盐,铵盐可用纳氏试剂直接显色、酚-次氯酸盐显色或酶偶联反应显色。


 尿素测定目前多采用尿素酶偶联法:用尿素酶分解尿素产生氨,氨在谷氨酸脱氢酶的作用下使NADH氧化为NAD+时,通过34 0nm吸光度的降低值可计算出尿素含量。此反应是目前自动生化分析仪上常用的测定原理。此外,尿素酶水解尿素产生氨的速率,也可用电导的方法进行测定,其电导的增加与氨离子浓度有关,反应只需要很短的时间,适用于自动分析仪。


  2)酚-次氯酸盐显色法:尿素酶水解尿素生成氨和酚及次氯酸盐,在碱性环境中作用形成对-醌氯亚胺,亚硝基铁氰化钠催化此反应:对-醌氯亚胺同另一分子的酚作用,形成吲哚酚,它在碱性溶液中产生蓝色的解离型吲哚酚:此反应敏感,血清用量少(10μl),无需蛋白沉淀,一般用于手工操作测定中。


  3)纳氏试剂显色法:尿素经尿素酶作用后生成氨,氨可与纳氏试剂(HgI2.2KI的强碱溶液)作用,生成棕黄色的碘化双汞铵。


尿素酶法的优点是反应专一,特异性强,不受尿素类似物的影响,缺点是操作费时,且受体液中氨的影响。  


 二乙酰一肟法(直接法):尿素可与二乙酰作用,在强酸加热的条件下,生成粉红色的二嗪化合物(Fearom反应),在540nm比色,其颜色强度与尿素含量成正比。二乙酰不稳定,用二乙酰一肟代替,后者遇酸水解成二乙酰。试剂中加入Fe3+或Cd2+及硫氨脲,可提高灵敏度,增加显色稳定性,其中Fe3+和Cd2+有氧化作用,还能消除羟胺的 干扰作用。提高酸的浓度可增加灵敏度。


南开大学CNA-1200尿素在线分析仪

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科瑞达CNA-1200 泳池水在线尿素分析仪测量原理:尿素与二乙酰一肟及安替比林反应呈现黄色,在波长450nm处进行比色测量其吸光度,从而计算浓度值。

                                           

资料提供:售前  李亚红

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